許多實(shí)驗(yàn)涉及蛋白質(zhì)的鑒定(例如探究特定酶的作用模式),只有在相關(guān)的蛋白質(zhì)可以從細(xì)胞內(nèi)許多其他蛋白質(zhì)中分離出來(lái)后才有可能成功。得到均一的蛋白質(zhì)溶液或者蛋白質(zhì)復(fù)合物也是其他分析過(guò)程的先決條件,例如序列分析、蛋白質(zhì)...[繼續(xù)閱讀]

    獲得蛋白質(zhì)的原料多種多樣。簡(jiǎn)單的情況是所需要的蛋白質(zhì)已經(jīng)存在于溶液中(例如血液、牛乳或者細(xì)胞培養(yǎng)物的上清液),純化可以直接開(kāi)始。然而,在多數(shù)情況下,含有蛋白質(zhì)的抽提物需要從起始材料制備。在過(guò)去,動(dòng)物和植物細(xì)胞常...[繼續(xù)閱讀]

    7.3.1電泳原理蛋白質(zhì)在水溶液中,除了在等電點(diǎn)之外的所有pH下,均帶有一定的電荷。因此它們可以在電場(chǎng)中遷移。遷移的比速率v與每分子所帶電荷數(shù)成正比,與粒子的Stokes半徑和介質(zhì)的黏度成反比:v=z/(6πηr)。凝膠電泳分離蛋白比在游...[繼續(xù)閱讀]

    這些技術(shù)追溯到早期的蛋白質(zhì)純化。在過(guò)去,通過(guò)改變蛋白的溶解性沉淀蛋白常常是唯一的可以使用的富集方法?，F(xiàn)在,富集經(jīng)常是通過(guò)疏水相互作用色譜來(lái)獲得(參見(jiàn)7.5)。蛋白質(zhì)的溶解性主要取決于蛋白表面親水和疏水區(qū)域的分布。...[繼續(xù)閱讀]

    7.5.1分離的一般規(guī)律本節(jié)中提到的分離規(guī)律可以用于純化所有種類(lèi)的蛋白質(zhì)。它們的大多數(shù)基于蛋白質(zhì)對(duì)于凝膠基質(zhì)的特定吸附,以及接下來(lái)進(jìn)行的以含有線性的或者逐步分級(jí)的濃度梯度的特定緩沖液洗脫。使用吸附技術(shù)非常流行并...[繼續(xù)閱讀]

    7.6.1例1:從牛視網(wǎng)膜桿細(xì)胞胞漿中純化核苷二磷酸激酶核苷二磷酸激酶(NDPK)在自然界普遍存在,主要是胞漿蛋白,能夠從5′-核苷三磷酸(NTPs)轉(zhuǎn)移第三位高能磷酸殘基到核苷二磷酸(NDPs)上。因此它們是細(xì)胞中從ATP和NDPs合成其他NTPs所必需...[繼續(xù)閱讀]

    Deutscher,M.P.(ed.)1990,MethodsinEnzymology,vol.182,GuidetoProteinPurification,AcademicPress,SanDiego.Janson,J.C.,Ryden,L.1998,ProteinPurification,Principles,HighResolutionMethodsandApplications,2ndedn,Wiley-VCH,Weinheim.Scopes,R.K.1994,ProteinPurificatio...[繼續(xù)閱讀]

    質(zhì)譜是儀器分子分析的高靈敏度技術(shù),它發(fā)明于約90年前。物理學(xué)家湯姆森和阿斯頓在英格蘭劍橋開(kāi)發(fā)了該技術(shù),最初用于元素分析。在20世紀(jì)50年代質(zhì)譜擴(kuò)展到有機(jī)化學(xué)?，F(xiàn)今,有很多類(lèi)型的質(zhì)譜專(zhuān)門(mén)用于分析元素、小的氣體分子,或者...[繼續(xù)閱讀]

    質(zhì)譜儀由三個(gè)功能單元組成:離子源、質(zhì)量分析器和檢測(cè)器。對(duì)于質(zhì)譜分析而言,游離氣體離子產(chǎn)生于在離子源中的樣品,然后在高真空中聚焦成離子束。質(zhì)量分析器根據(jù)粒子束中離子的質(zhì)荷比(m/z)將離子分離,這些離子被檢測(cè)器記錄。...[繼續(xù)閱讀]

    每一個(gè)質(zhì)譜圖都需要用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)校正,以保證精確的質(zhì)量確定(外標(biāo)法)。更精確的數(shù)據(jù)可以用被稱(chēng)為內(nèi)標(biāo)法的方法獲取,該法在記錄的圖譜中包括已知質(zhì)核比的峰。在樣品中已經(jīng)存在的來(lái)自分析物的信號(hào)(例如已知的污染物)可以用作參...[繼續(xù)閱讀]