軟骨組織是CS的主要來源,而非軟骨的結(jié)締組織中(如皮、腱等)則同時(shí)含有CS和DS。如果從組織中先制取PG,再由PG制得GAG則成本必然較高,故均由組織直接通過蛋白質(zhì)水解制得總GAG,再由總GAG中分離得到CS或DS。2.3.2.1　堿水解法GAG可由堿水...[繼續(xù)閱讀]

    通過蛋白質(zhì)水解制得的GAG,可通過以下方法進(jìn)行回收:(1)在氯化鈉或醋酸鈉存在下用乙醇沉淀;(2)用季銨鹽沉淀,常用的季銨鹽有氯化十六烷基吡啶(cetylpyrydiniumchloride,CPC)和溴化十六烷基三甲基銨(cetyltrimethylammoniumbromide,CTAB)等;(3)用陰離子...[繼續(xù)閱讀]

    乙醇分級(jí)分離是分離GAG混合物的常用方法,適用于大規(guī)模分離,尤其適用于CS/DS與CS分離和KS與CS分離。在適合的條件下,此法可直接用于組織消化液。如有多種GAG存在,可先將混合物用季銨鹽或離子交換劑分離后,再用乙醇分級(jí)分離,效果更...[繼續(xù)閱讀]

    GAG的聚陰離子與某些表面活性物質(zhì)如CPC、CTAB等形成絡(luò)合物,在低離子強(qiáng)度的水溶液中不溶解。離子強(qiáng)度大時(shí),這種絡(luò)合物可解離并溶解。使絡(luò)合物沉淀解離的最低鹽濃度稱為臨界鹽濃度,這取決于GAG聚陰離子的電荷密度和酸根(硫酸基和...[繼續(xù)閱讀]

    GAG由于具有酸性基團(tuán),在溶液中以聚陰離子的形式存在,可用陰離子交換劑進(jìn)行交換吸附。可采用的陰離子交換劑有DEAE-纖維素、Q-SepharoseFastFlow、AmberliteFPA94Cl、Dowex1-Cl等。將一種牛軟骨的粗制品用Q-SepharoseFastFlow陰離子交換劑柱吸附...[繼續(xù)閱讀]

    凝膠過濾色譜也用于分離GAG,GAG洗脫部位取決于其分子大小。色譜固定相包含特定大小范圍的孔隙,GAG根據(jù)其分子大小,被排出在孔外或在孔內(nèi)與孔外的流動(dòng)相中保持平衡。選用合適的分子篩,如葡聚糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠和瓊脂糖凝...[繼續(xù)閱讀]

    采用能特異降解GAG的酶,可明確鑒別不同的GAG,見表2.4。某一種酶對(duì)某種GAG敏感,生成降解產(chǎn)物,然后通過色譜法檢測(cè),明確GAG的種類。表2.4GAG特異性解聚用酶*[10]續(xù)表注:*+敏感;-抗性;乙酰肝素酶和肝素酶均指源自Flavobacterium的產(chǎn)品。如下...[繼續(xù)閱讀]

    本章介紹了幾種提取分離GAG的方法。在實(shí)際工作中不能只依靠一兩種即達(dá)到分離純化GAG的目的,硫酸化程度、IdoUA含量和Mr均能影響提取分離過程,只有通過實(shí)驗(yàn)選取適宜的方法和合適的條件才能獲得高產(chǎn)量和高純度的產(chǎn)品。探索低成...[繼續(xù)閱讀]

    硫酸軟骨素(CS)是共價(jià)連接在蛋白質(zhì)上形成蛋白聚糖(PG)的一類糖胺聚糖(GAG)。CS廣泛分布于動(dòng)物組織的細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)和細(xì)胞表面,糖鏈由交替的葡糖醛酸(GlcUA)和N-乙酰半乳糖胺(GalNAc,又稱N-乙酰氨基半乳糖)二糖單位組成,通過一個(gè)四糖...[繼續(xù)閱讀]

    GAG是線性、可硫酸化、帶負(fù)電荷的多糖,相對(duì)分子質(zhì)量(Mr)范圍(10～100)×103。GAG主要有兩類:非硫酸化的GAG,包括玻璃酸(HA,又稱透明質(zhì)酸);硫酸化的GAG,包括CS、DS、硫酸角質(zhì)素(KS)、肝素(Hep)和硫酸乙酰肝素(HS)。GAG主鏈由重復(fù)二糖單位組成...[繼續(xù)閱讀]