應(yīng)用
氣質(zhì)聯(lián)用儀被廣泛應(yīng)用于復(fù)雜組分的分離與鑒定,其具有GC的高分辨率和質(zhì)譜的高靈敏度,是生物樣品中藥物與代謝物定性定量的有效工具。
質(zhì)譜儀的基本部件有:三部分組成,它們被安放在真空總管道內(nèi)。
接口:由GC出來的樣品通過接口進(jìn)入到質(zhì)譜儀,接口是氣質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)的關(guān)鍵。
接口作用
1 壓力匹配——質(zhì)譜離子源的真空度在10-3Pa,而GC色譜柱接口的作用就是要使兩者壓力匹配。
2 組分濃縮——從GC色譜柱流出的氣體中有大量載氣,接口的作用是排除載氣,使被測物濃縮后進(jìn)入離子源。
常見接口技術(shù)
1 分子分離器連接(主要用于填充柱)
擴(kuò)散型——擴(kuò)散速率與物質(zhì)分子量的平方成反比,與其分壓成正比。當(dāng)色譜流出物經(jīng)過分離器時(shí),小分子的載氣易從微孔中擴(kuò)散出去,被真空泵抽除,而被測物分子量大,不易擴(kuò)散則得到濃縮。
2 直接連接法(主要用于毛細(xì)管柱)
在色譜柱和離子源之間用長約50cm,內(nèi)徑0.5mm的不銹鋼毛細(xì)管連接,色譜流出物經(jīng)過毛細(xì)管全部進(jìn)入離子源,這種接口技術(shù)樣品利用率高。
3 開口分流連接
該接口是放空一部分色譜流出物,讓另一部分進(jìn)入質(zhì)譜儀,通過不斷流入清洗氦氣,將多余流出物帶走。此法樣品利用率低。
離子源
離子源的作用是接受樣品產(chǎn)生離子,常用的離子化方式有:
1、電子轟擊離子化(electron impact ionization,EI)EI是最常用的一種離子源,有機(jī)分子被一束電子流(能量一般為70eV)轟擊,失去一個(gè)外層電子,形成帶正電荷的分子離子(M+),M+進(jìn)一步碎裂成各種碎片離子、中性離子或游離基,在電場作用下,正離子被加速、聚焦、進(jìn)入質(zhì)量分析器分析。
EI特點(diǎn):
?、拧⒔Y(jié)構(gòu)簡單,操作方便。
?、?、圖譜具有特征性,化合物分子碎裂大,能提供較多信息,對化合物的鑒別和結(jié)構(gòu)解析十分有利。
?、恰⑺梅肿与x子峰不強(qiáng),有時(shí)不能識別。
本法不適合于高分子量和熱不穩(wěn)定的化合物。
2、化學(xué)離子化(chemicalionization,CI)將反應(yīng)氣(甲烷、異丁烷、氨氣等)與樣品按一定比例混合,然后進(jìn)行電子轟擊,甲烷分子先被電離,形成一次、二次離子,這些離子再與樣品分子發(fā)生反應(yīng),形成比樣品分子大一個(gè)質(zhì)量數(shù)的(M+1) 離子,或稱為準(zhǔn)分子離子。準(zhǔn)分子離子也可能失去一個(gè)H2,形成(M-1)離子。
CI特點(diǎn)
?、?、不會(huì)發(fā)生象EI中那么強(qiáng)的能量交換,較少發(fā)生化學(xué)鍵斷裂,譜形簡單。
?、?、分子離子峰弱,但(M+1) 峰強(qiáng),這提供了分子量信息。
3、場致離子化(fieldionization,F(xiàn)I) 適用于易變分子的離子化,如碳水化合物、氨基酸、多肽、抗生素、苯丙胺類等。能產(chǎn)生較強(qiáng)的分子離子峰和準(zhǔn)分子離子峰。
4、場解吸離子化( field desorption ionization,F(xiàn)D) 用于極性大、難氣化、對熱不穩(wěn)定的化合物。
5、負(fù)離子化學(xué)離子化(negative ion chemical ionization,NICI)是在正離子MS的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種離子化方法,其給出特征的負(fù)離子峰,具有很高的靈敏度(10-15g)。
質(zhì)量分析
其作用是將電離室中生成的離子按質(zhì)荷比(m/z)大小分開,進(jìn)行質(zhì)譜檢測。常見質(zhì)量分析器有:
1、四極質(zhì)量分析器(quadrupole analyzer)
原理:由四根平行圓柱形電極組成,電極分為兩組,分別加上直流電壓和一定頻率的交流電壓。樣品離子沿電極間軸向進(jìn)入電場后,在極性相反的電極間振蕩,只有質(zhì)荷比在某個(gè)范圍的離子才能通過四極桿,到達(dá)檢測器,其余離子因振幅過大與電極碰撞,放電中和后被抽走。因此,改變電壓或頻率,可使不同質(zhì)荷比的離子依次到達(dá)檢測器,被分離檢測。
2、扇形質(zhì)量分析器
磁式扇形質(zhì)量分析器(magnetic-sector massanalyzer)被電場加速的離子進(jìn)入磁場后,運(yùn)動(dòng)軌道彎曲了,離子軌道偏轉(zhuǎn)可用公式表示:當(dāng)H,V一定時(shí),只有某一質(zhì)荷比的離子能通過狹縫到達(dá)檢測器。
特點(diǎn):分辨率低,對質(zhì)量同、能量不同的離子分辨較困難。
3、雙聚焦質(zhì)量分析器(double-focusing massassay)由一個(gè)靜電分析器和一個(gè)磁分析器組成,靜電分析器允許有某個(gè)能量的離子通過,并按不同能量聚焦,先后進(jìn)入磁分析器,經(jīng)過兩次聚焦,大大提高了分辨率。
4、離子阱檢測器(ion trap detector)
原理類似于四極分析器,但讓離子貯存于井中,改變電極電壓,使離子向上、下兩端運(yùn)動(dòng),通過底端小孔進(jìn)入檢測器。
檢測器:
檢測器的作用是將離子束轉(zhuǎn)變成電信號,并將信號放大,常用檢測器是電子倍增器。當(dāng)離子撞擊到檢測器時(shí)引起倍增器電極表面噴射出一些電子,被噴射出的電子由于電位差被加速射向第二個(gè)倍增器電極,噴射出更多的電子,由此連續(xù)作用,每個(gè)電子碰撞下一個(gè)電極時(shí)能噴射出2~3個(gè)電子,通常電子倍增器有14級倍增器電極,可大大提高檢測靈敏度。
測定方法
總離子流色譜法(total ionization chromatography,TIC)——類似于GC圖譜,用于定量。l反復(fù)掃描法(repetitive scanningmethod,RSM)——按一定間隔時(shí)間反復(fù)掃描,自動(dòng)測量、運(yùn)算,制得各個(gè)組分的質(zhì)譜圖,可進(jìn)行定性。l質(zhì)量色譜法(masschromatography,MC)——記錄具有某質(zhì)荷比的離子強(qiáng)度隨時(shí)間變化圖譜。在選定的質(zhì)量范圍內(nèi),任何一個(gè)質(zhì)量數(shù)都有與總離子流色譜圖相似的質(zhì)量色譜圖。
選擇性離子監(jiān)測(selected ion monitoring,SIM)——對選定的某個(gè)或數(shù)個(gè)特征質(zhì)量峰進(jìn)行單離子或多離子檢測,獲得這些離子流強(qiáng)度隨時(shí)間的變化曲線。其檢測靈敏度較總離子流檢測高2~3個(gè)數(shù)量級。
質(zhì)譜圖——為帶正電荷的離子碎片質(zhì)荷比與其相對強(qiáng)度之間關(guān)系的棒圖。質(zhì)譜圖中最強(qiáng)峰稱為基峰,其強(qiáng)度規(guī)定為100%,其它峰以此峰為準(zhǔn),確定其相對強(qiáng)度。
保養(yǎng)維護(hù)
氣質(zhì)聯(lián)用儀可以看作是毛細(xì)管柱氣相色譜儀加上質(zhì)量檢測器的組合。它常出的問題也是兩者相加。
1、儀器涉及的密閉性問題
氣質(zhì)聯(lián)用儀是一個(gè)氣體運(yùn)行的系統(tǒng),因而儀器的密封性相當(dāng)重要。
(1)換柱:毛細(xì)管柱進(jìn)入質(zhì)譜腔中的長度不適當(dāng),太長或太短都不行。
(2)墊圈要松緊合適,太松會(huì)有漏氣的隱患,太緊則會(huì)壓碎墊圈,每次更換色譜柱時(shí)需要更換新的密封墊圈。
(3)清洗離子源時(shí)打開腔體后要注意其密封性。
2、色譜柱的使用與保存
(1) 色譜柱使用時(shí)應(yīng)注意說明書中標(biāo)明的最低和最高溫度,不能超過色譜柱的溫度上限使用,否則會(huì)造成固定液流失,還可造成對檢測器的污染。要設(shè)定最高允許使用溫度,如遇人為或不明原因的突然升溫,GC會(huì)自動(dòng)停止升溫以保護(hù)色譜柱。氧氣、無機(jī)酸堿和礦物酸都會(huì)對色譜柱固定液造成損傷,應(yīng)杜絕這幾類物質(zhì)進(jìn)入色譜柱。
(2) 色譜柱拆下后通常將色譜柱的兩端插在不用的進(jìn)樣墊上,如果只是暫時(shí)拆下數(shù)日則可放于干燥器中。
(3) 色譜柱的安裝
色譜柱的安裝應(yīng)按照說明書操作,切割時(shí)應(yīng)用專用的陶瓷切片,切割面要平整。不同規(guī)格的毛細(xì)管柱選用不同大小的石墨墊圈,注意接進(jìn)樣口一端和接質(zhì)譜一端所用的石墨墊圈是不同的,不要混用。進(jìn)入進(jìn)樣口一端的毛細(xì)管長度要根據(jù)所使用的襯管而定,儀器公司提供了專門的比對工具,同樣,進(jìn)入質(zhì)譜一端的毛細(xì)管長度也需要用儀器公司提供的專門工具比對。柱接頭螺帽不要上得太緊,太緊了壓碎石墨圈反而容易造成漏氣,一般用手?jǐn)Q緊后再用扳手緊四分之一圈即可。接質(zhì)譜前先開機(jī)讓柱末端插入盛有有機(jī)溶劑的小燒杯,看是否有氣泡溢出且流速與設(shè)定值相當(dāng)。嚴(yán)禁無載氣通過時(shí)高溫烘烤色譜柱,以免造成固定液被氧化流失而損壞色譜柱。
3、離子源和預(yù)桿的清洗
清洗前先準(zhǔn)備好相關(guān)的工具及試劑,然后打開機(jī)箱,小心地拔開與離子源連接的電纜,擰松螺絲,取下離子源。取預(yù)桿之前先取下主四極桿,豎放在無塵紙上,再取下預(yù)桿待洗。注意整個(gè)操作過程一要小心謹(jǐn)慎,二要避免灰塵進(jìn)入腔體。將離子源各組件分離,在離子源的所有組件中,燈絲、線路板和黑色陶瓷圈是不能清洗的。而離子盒及其支架、三個(gè)透鏡、不銹鋼加熱塊以及預(yù)桿需要用氧化鋁擦洗,將600目的氧化鋁粉用甘油或去離子水調(diào)成糊狀,用棉簽蘸著擦洗,重點(diǎn)擦洗上述組件的內(nèi)表面,即離子的通道。氧化鋁擦洗完畢后,用水沖凈,然后分別用去離子水、甲醇、丙酮浸泡,超聲清洗,待干后組合好離子源,先安裝好預(yù)桿、四極桿,最后小心裝回離子源,蓋好機(jī)箱,清洗完畢。
內(nèi)容來自百科網(wǎng)